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ELISA实验之洗涤要点

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ELISA实验之洗涤要点


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洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中,洗涤是最主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,不得马虎。
洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外,手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种,过程如下:

1.浸泡式
①吸干或甩干孔内反应液;
②用洗涤液过洗一遍;
③浸泡,即将洗涤液注满板孔,放置1~2分钟,间歇摇动,浸泡时间不可随意缩短;
④吸干孔内液体,吸干应彻底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液体后在清洁毛巾上拍干;
⑤重复操作③和④,洗涤3~4次。在间接法中如本底较高,可增加洗涤次数或延长浸泡时间。


2.流水冲洗式

流水冲洗法最初用于小珠载体的洗涤,洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置,使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗,持续冲洗2分钟后,吸干液体,再用蒸馏水浸泡2分钟,吸干即可。浸泡式犹如盆浴,流水冲洗式则好比淋浴,其洗涤效果更为彻底,且也简便、快速。已有实验表明,流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压,让水流冲击板孔表面,洗涤效果更佳。


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