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细胞培养

细胞培养

一、项目介绍

  细胞 (cell)是生物体基本的结构和功能单位,已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成,因此,对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。以细胞为研究对象,从细胞的整体水平、亚显微水平、分子水平等三个层次,研究细胞和细胞器的结构和功能、细胞的生活史和各种生命活动规律颇具意义。

二、样品保存运输(寄送细胞时请下载资料中心样品寄送信息单《细胞送样单》并填写好发送给平台助理)

  1、活细胞运输方法

  请用如图所示不透气培养瓶培养细胞, 待细胞汇合度达到70% 左右时,灌满新鲜培养基至接近瓶口处,拧紧瓶盖,封口膜进一步封住瓶口。瓶身上做好标记(细胞名称,培养基,日期等)。打包时必需做防震处理。常温寄送。

  2、冻存细胞运输方法

  一定要保证干冰充足(2-3天寄送时间,8-10kg干冰较充足),冻存管确保被干冰完全覆盖。切勿冻融。勿将水冰混入干冰件中。

  3、流式样本接收注意事项

  ①细胞凋亡

  需要活细胞(外地样本不接)。如果细胞带荧光,一定要在交接单和培养板上备注,否则按照无荧光处理。如果因此导致检测结果不可用及样本浪费,我方概不负责,也不接受退单。

  ②细胞周期

  周期需要细胞量比较多,6 孔板送样要求汇合度在70%以上,但不能超过90%。外地样品,需用预冷的70% 乙醇固定过夜后(贴壁细胞需要消化后进行固定),离心弃固定液,加1ml PBS重悬,封口膜封好,4℃运输寄到实验室。

  ③流式JC-1

  需要活细胞(外地样本不接)。细胞汇合度高于70%(6 孔板),多提供2 个空白孔,做阴性和阳性对照。如果细胞带红光或绿光,不能检测。

  ④流式ROS

  需要活细胞(外地样本不接)。细胞汇合度高于70%(6 孔板),多提供2 个空白孔,做阴性和阳性对照。如果细胞带绿光,不能检测。

  ⑤细胞表抗

  提前确定公司是否有相应流式抗体(组化抗体不可用),其他抗体需要客户自己提供(外地样本不接)。

  ⑥流式三标

  提前告知样本具体数量和类型(血液或脾脏~)。血样用抗凝管收集(胞内染色至少需要1.5 mL,表抗需要约1 ml),注意防止凝血,4℃保存运输。血样4℃保存最多只能存放一周,时间越久实验结果越差。取血后,需尽快寄到实验室;取脾脏时尽量将动物带到实验室,直接在实验室取材后开始实验,若不能将动物带到实验室,取材(整个脾脏)后将组织放在含有PBS 的EP 管或离心管中,4℃保存,提细胞必须在取材后6 小时以内完成,注意有些检测指标(Treg,TH1, TH2 等)需无菌提取。外地样本不接。

  4、质粒、RNA类、病毒类

  质粒载体、miRNA、siRNA等-20℃寄送。

  慢病毒:-80℃保存、 充足纯干冰寄送。

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